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新冠病毒检测方法汇总——除了核酸试剂盒还有这些手段

抗击新冠肺炎 新冠病毒检测 方法 汇总 0 12000

目前可能适用于新型冠状病毒的检测手段有核酸检测方法、病毒分离鉴定、免疫学检测等。



新型冠状病毒COVID-2019仍然是公众最关注的的话题,红外热成像仪、核酸检测试剂盒、抗体快速测试卡等一大批仪器在这场抗疫战争起到了至关重要的的作用。

那么,目前可能适用于新型冠状病毒的检测手段都有哪些?


一:核酸检测方法


1. 全基因组测序
全基因组测序可准确鉴定病毒,但是目前的高通量测序平台测序时间较长,灵敏度相对较低。

特点:可准确鉴定病毒、在病毒溯源和流行病学调查中有重要作用
问题:测序时间较长、灵敏度相对较低

2. RT-PCR
基于病毒基因保守序列的RT-PCR检测方法,是呼吸道病毒检测的常用方法,本次新冠病毒检测也同样适用。该方法通过对病毒RNA进行提取、逆转录、PCR扩增病毒保守序列(RdRP基因(特异性靶点)、E蛋白基因、N蛋白基因以及一个鉴定保守基因S区位点;可以只检测RdRP基因或者选择RdRP基因和其他多个基因确认),扩增体系中的荧光蛋白会结合扩增出的双链DNA序列从而发出荧光,根据检测到的荧光值判断是否有病毒存在并定量。

该方法的优点是相较于其他抗原抗体法(如胶体金技术)更为灵敏,检测结果更为准确,但是检测需要专业的仪器和分子检测实验室以及专业的操作人员,操作不当或者实验室条件不足可能会因气溶胶污染造成假阳性,且整个流程需要几个小时,相较于胶体金法时间更长。

3. CRISPR
CRISPR系统由向导RNA(gRNA)和Cas蛋白组成,gRNA能够指导Cas识别并切割带有特异序列的RNA或者DNA分子。其中Cas13a蛋白在特异性切割靶标RNA时,会继续切割非靶标RNA,利用这一特点,在整个体系中加入带有荧光标记的RNA信号分子,一旦带有荧光的RNA被切开,就会发出荧光信号,该技术与等温扩增技术结合,可高特异性高灵敏性低对病毒核酸进行检测。

该技术检测时间相较于RT-PCR短,但是CRISPR系统研究出现时间较短,该系统存在有脱靶的可能,其灵敏度和特异性还有待考证。

4. 逆转录环介导等温扩增法(RT-LAMP)和实时RT-LAMP
逆转录环介导等温扩增法(RT-LAMP)对2009年H1N1大流行病毒的敏感性为97.8%,特异性为100%。基于LAMP的检测方法也被用于检测高致病性的H5N1和H7N9禽流感病毒,其敏感性比基于RT-PCR的方法具有可比性或更高的灵敏度。

二:病毒分离鉴定


病毒培养是诊断流感病毒感染的传统方法之一,但是传统的分离鉴定方法需要连续培养多天,敏感性和特异性都会低于核酸检测方法,虽然在前期确定侵害性病原物起到关键作用,但较为耗时,且不便捷,不能满足大量疑似患者筛查需求。

三:免疫学检测方法


1. 直接免疫荧光技术
将免疫学方法(抗原抗体特异结合)与荧光标记技术结合起来研究特异蛋白抗原在细胞内分布的方法。由于荧光素所发的荧光可在荧光显微镜下检出,从而可对抗原进行细胞定位,这种检测方法的敏感性低于核酸检测方法。

2. 免疫胶体金层析技术
胶体金是一种常用的标记技术,是蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面的包被,是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型的免疫标记技术。用于检测病毒使用的试剂条包被的是人体免疫系统中出现的该病毒特异性抗体或者是检测病毒本身的抗原,检测结果会出现肉眼可见的红色或者粉色条带。

虽然免疫胶体金层析技术操作简单,出结果快(一般为20分钟),但是此方法敏感性较差,加入样本后的原理靠的是层析,也就是往外分散,如果材料等质量有误差,会影响检测结果;也会因为病人感染时间较短或者采样部位导致病毒含量较低,导致出现假阴性。另外,该方法由于依赖抗原抗体,对于前期开发时选择包被的抗原/抗体最为关键,短时间内开发出的产品有待确认其特异性和灵敏性。

四:其他方法


基因芯片技术、酶联免疫吸附测定(ELISA)、IgG及IgM免疫荧光检测。

在本次疫情中,通过临床特征和各项指标的判断,以及核酸检测来最终确诊是否为新冠病毒感染,其中CT影像和核酸检测一直作为诊断标准在疫情诊断中发挥着重要作用。从目前来看,不同检测方法均存在着各自的优势和弊端,只有综合运用各种检测工具,才能实现快速高效的检测,缩短新冠患者的确诊周期。


四川大学华西公共卫生学院分析测试中心介绍

      四川大学华西公共卫生学院分析测试中心是由四川大学批准成立,由华西公共卫生学院负责管理的独立的第三方对外检验检测服务机构。中心主要从事食品/保健食品,消毒产品,农药、肥料、化学品、化妆品毒理鉴定,生活饮用水检测、职业病危害因素检测工作。

      中心现有员工61人,其中博士学历13人,硕士学历15人,高级技术人员12人(19%),中级技术人员14人(含同等能力,占22.5%)。中国合格评定认可委员会主任评审员1人,检验检测机构资质认定评审员2人,国家食品药品监督管理总局保健食品专家评审组成员2人。

      中心设有办公室(含QAU)、综合检测室二个科室,综合检测室下设4个平台,包括功能毒理平台、理化平台、微生物平台、实验动物平台。现有面积约2000m2,其中实验室面积约1700m2,具有10000级净化实验室(带局部100级)约60m2、SPF动物房约200m2和屏障级IVC动物房约400m2。

       中心配备了Bruker小动物全自动高分辨率X光机、Beckman Coulter全自动生化分析仪,Medonic全自动血液细胞分析仪、徕卡病理设备、动式吸入染毒柜、ICP-MS、Agilent气相色谱仪、离子色谱仪、DIONEX高效液相色谱仪、Thermo Elemental原子吸收分光光度计、职业卫生现场检测等设备。

      中心是由国家食品药品监督管理总局、农业部、国家卫生和计划生育委员会认定的保健食品、农药、消毒产品检验检测机构,是国家病原微生物卫生应急实验室网络成员单位,拥有《实验室认可证书》、《检验检测机构资质认定证书》、《农药登记试验单位资质证书》、《实验动物使用许可证》、《四川省可感染人类病原微生物二级生物安全实验室备案登记书》。

     为确保检测结果客观公正性,给客户提供“科学高效,严谨规范”的服务,中心建立了符合国际标准的管理体系,检测工作均依据国家有关法律、法规、规章及技术规范进行。



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